ASTM A790 2507 / 2205 1.4462 / 1.4410 Duplex iuncta tube Industrii chemica componentis chemicae , Defectus SPECC1L auget stabilitatem artuum plicatorum et reductio cristae cranii cellulis neuralis effusio.

Gratias tibi ago pro natura.com adire.Versionem navigatoris limitata CSS auxilio uteris.Ad optimam experientiam commendamus ut navigatro renovato uteris (vel inactivare Compatibilitas Modus in Penitus Rimor).Praeterea, ad sustentationem permanentem, situm sine stylis et JavaScript ostendemus.

ASTM A790 2507 / 2205 1.4462 / 1.4410 Duplex iuncta tube For Chemical Industry

Liaocheng Sihe SS Material Co, Ltd.is a leading manufacturer who is specialized in stainless steel seamless pipes, bright annealed tubes, seamless coiled tubing etc.Ad clientes faciliores , fistulas quoque et fistulas iuncta sunt .Liaocheng Sihe SS Material Co, Ltd.habet antecedens producendi et probandi apparatum.Tuae postulationi prorsus satisfacere possumus.Secundum regulam strictissime , fistulae quae a nobis productae semper tolerantiam rectam OD et WT habent .Tolerantia temperantia est stricte secundum signa producere.Nostra producta semper contenta clientibus.Customers nostros fructus emerunt plures fructus creaverunt.
a) OD ( Diameter exterior ) : 3.18mm ad 101.6mm
b) WT (Wall Crassitudo): 0.5mm ad 20mm
c) Longitudo: secundum Lorem scriptor postulationem
d) Signa: ASTM A312;ASTM A269;ASTM A789;ASTM A790 etc
e) Methodus processus : ERW, EFW etc

Iunctae tres articulos per dictum ostendentes.Utere globulis posterioribus et proximis movere per labitur, vel globulis lapsus moderatoris in fine movere per singulas lapsus.
Cremae cellae craniales neuralis (CNCC) embryonales plicas neuralis exedunt et ad arcus pharyngeas migrant, quae maxime mediae structurae formant.CNCC dysfunctiones magni ponderis munus agit in scissura orofacialis etiologia, de malformatione communi congenita.Mutationes heterozygoae SPECC1L inventae in aegris cum fissuris atypicis et syndromicis.Hic nuntiamus auctam maculam partium adhaesivae canonicae (AJ) partium, β-catenin et E-cadherin in cellulis excultis SPECC1L, et micrographae electronicae apicales-basales diffusioni AJ ostendunt.Ad munus SPECC1L intelligendum in morphogenesis craniofacialis, exemplar musculi spec1l deficientis creavimus.Homozygous mutantes sunt lethales embryones et clausuram neuralis tubus hebetes exhibent et laminationem CNCC.AJ dapibus inficiens augetur mutant in plicas neuralis.Hic defectus AJ consentaneum est cum defectu delaminationis CNCC, solutione AJ postulante.Praeterea Specc11 mutantes pi3K-AKT redegerunt significans apoptosin et auctus.In vitro, lenis inhibitionis PI3K-AKT significatio in cellulis silvestribus typus satis erat ad mutationes AJ mo- endas.AJ mutationum SPECC1L colaphorum inductae per activitatem itineris PI3K-AKT retorqueri possunt.Simul sumpta, haec notitia suadeant quod SPECC1L, ut novus ordinator PI3K-AKT significans et biologiam AJ, postulari debet ad clausuram tubi neuralis et stratificationis CNCC.
Neuroectoderm dorsalem neuroectoderm cranialem cristam neuralis localise et a neuroepithelio plicarum neuralis evolutionis distrahendum per processum transitum epithelial-mesenchymalem (EMT) 1,2,3.Praemigrans epitheliales CNCC commissuras intercellulares perturbant et migrantes fiunt CNCC mesenchymales, quae primum et secundum arcus pharynges implent et maxime cartilaginem craniofacialis formant.Ita genes quae functionem CNCC moderantes saepe in anomaliis craniofacialibus congenita etiologia distrahuntur sicut foraminum orofacialium, plerumque 1/800 partus in solis US partus afficientibus.Una deformities congenita.
Delaminatio CNCC cum occlusione tubi neuralis anterioris inter 8.5 et 9.5 dies embryonis in muribus coincidit.Mutantes plurium generum muris orofacialis fissurae associatae etiam formam aliquam tubi neuralis defectus exhibent, inter Irf69, 10, Ghrl310, Cfl111, et Pdgfrα12.Sed processus tubi neuralis clausurae et stratificationis CNCC independentes considerari possunt, sicut Splotch mutant mus (Pax3) defectus in tubo neurali clausurae exhibet sine effectu in CNCC stratificatione vel migratione 13,14.Donec mus exempla cum defectibus in CNCC dissectione et tubo neurali clausurae communem fundamentum hypotheticum horum duorum processuum delineare adiuvabit.
Solitudo CNCC e cellulis neuroepithelis requirit dissolutionem juncturae adhaesivae (AJs), quae composita ex complexionibus interdum continentibus, inter alios E-cadherin, β-catenin, α-E-catenin, et α-actinin cum filamentis actin 2 adjunctis. E-cadherin in plicarum neurali studiis elocutionis reductionem vel moram in CNCC delaminatione demonstravit.Vicissim suppressio E-cadherin consequitur in primo stratificatione 15, 16.Multae factorum, quae mediantibus EMT in CNCC stratificatione mediatae sunt, factores transcriptionis (AP2α, Id2, FOXD3, COCHLEA, TORTOR, SOX10) et matrix extracellulares (ECM) dapibus retexere ut matrix metalloproteinases (MMPs), tamen CNCCs directae regulatores cytoskeletales AJ sunt. nondum cognitum.Semita PI3K-AKT nota est gradus E-cadherin infestare, maxime ex investigatione cancri 17 .Recentes studiis docuerunt detrimentum PDGFα-substructio PI3K-AKT significans in muribus abnormitates craniofaciales ducit, incluso palato fissura et defectus tubi neuralis.Attamen incertus est relatio inter semitam PI3K-AKT et AJ stabilitatem in stratificatione CNCC.
Antea notavimus SPECC1L ut gene primam mutant in duobus hominibus cum fissura gravi quae ab ore ad oculum protenditur, nota fissura obliqua (ObFC) seu Tessier IV18 fissura.IN SPECC1L mutationum in duabus familiis multigeneralibus cum autosomal dominans Opitz G/BBB syndrome (OMIM #145410) notae sunt, in quibus singuli affecti hyperdistantiam et fissuram labii/palati 19 exhibebant, et in una familia cum syndrome Tibi overdistance (OMIM #145420) 20 .plusquam dimidium casuum Opitz G/BBB syndromae X-coniunctae sunt (OMIM #300000) et causantur mutationes in gene MID1, quae encodes dapibus 22 microtubuli-consociati sceleti cellulae.Hypothesizamus SPECC1L, dapibus etiam cum microtubulis et cytoskeleton sociatis, mediare signationem requiri ad cytoskeleton revellere per adhaesionem cellam et migrationem 18 .Per in vitro et in studiis vivo nunc describimus SPECC1L tanquam novae stabilitatis moderatorem AJ per PI3K-AKT significantem.In gradu cellularum, SPECC1L defectus effectus est in diminutione circa dapibus craticulae AKT et incrementum in dispersione apicali-basi AJ, quae eliminata est per activationem chemica itineris AKT.In vivo, Specc11 embryones deficientes ostendunt clausuram neuralis tubus imminutam et CNCC dissectionem reduci.Ita, SPECC1L functiones in adhaesione cellae valde ordinatae substructio signans quae requiruntur ad functionem normalem CNCC in morphogenesis faciei.
Ad designandum munus SPECC1L in plano celluloso, osteosarcoma stabilis superius descriptae lineae cellae U2OS in SPECC1L18 deficientes usi sumus.Hae cellulae stabiles U2OS cum SPECC1L (kd) colaphis modicis (60-70%) decrescebant in gradibus TRANSLATIONUM SPECC1L et servo, cum defectibus in migratione et ordinandis cytoskeletonis actin 18. E contra decrementum grave transiens. SPECC1L ostensum est ad vitia mitotica ducere 23 .Super notificatione ulteriore invenimus cellas nostras SPECC1L-kd mobiles morphologias in maximo confluentis gradu (Figura 1).Cellulae singulares et kd cellulae ad confluentiam humilis similes spectabant (Figura 1A,D).24 horarum post fusionem, cellulae suae figuram cuboidalem retinuerunt (fig. 1B, E), dum cellae SPECC1L-kd elongatae (fig. 1C, F).Ambitus huius mutationis in figura cellularum capta est ab in vivo vivo imaginatio cellularum cellarum et kd cellularum (movie 1).Ut munus SPECC1L in cellulis confluentibus determinemus, primum eius expressionem examinavimus.Invenimus formas SPECC1L dapibus auctas in fusione (Figura 1G), cum gradus SPECC1L transcriptum non crescebat (Figura 1H).Accedit, ut densitas cellulae augetur, interdum SPECC1L ad limites intercellulares congesti (fig. 2A-E), cum forma imbricatis cum membranae associatis β-catenin (Fig. 2A'-E').Societas SPECC1L data cum cytoskeleton 18,23, hypothesizavimus SPECC1L inter se cohaerere cum junctionibus tenaces actin-substructis (AJ).
(AF) SPECC1L colaphum (DF) cellulae elongatae ad confluentem altum (F) comparatae ad cellulas U2OS regendas (AC).Hic monstrata sunt tria ex sex punctis temporis (T1, T3, T6) quae in diversis cellularum densitatibus delecti sumus.(G) Analysis occidentalis maculae ostendens speciem dapibus SPECC1L stabiliri ad gradum confluentis comparatum ad humilem confluentis gradum in cellulis moderandis.Occidentis opprobrium SPECC1L demonstrat exspectationem 120 kDa band et altiorem hypotheticum pondus cohortis, fortasse post-translatione mutatum (*).Analysis occidentalis maculae sub iisdem conditionibus pro gravis et alta confluentia fiebat.Imagines exhibentes SPECC1L ad humilem et altum confluentem ab eadem labe desumpta sunt.Eadem macula sublata et examinata β-actin anticorpore.(H) Analysis quantitatis RT-pcr notabiles mutationes in SPECC1L graduum transcriptorum ostendit.Erroris vectes repraesentant SEMS ex quattuor experimentis independentibus.
(AE) Sex puncta temporis (T1-T6) repraesentans repraesentantes densitates cellularum ad analysin cellulas normalizandas et AJ mutationes in U2OS cellulis cum SPECC1L colaphum (kd).Prima quinque horum temporis punctorum singulas cellulas (T1), 50-70% fusione uvarum cellularum parvarum (T2), fusio sine cellulis kd reformandis (T3), cellulas kd reformans (T4), et 24 horarum mutationes.in posteriori forma kd (T5) cellulis.Dapibus SPECC1L praesertim in cytoplasmo apud T1 (A) dispersus est, sed cumulus eius observatus est in terminis intercellularis in punctis subsequentibus (B-E, sagittis).(FJ) β-catenin similem cumulum ostendit in terminis intercellularis cum complexu AJ coniungendis.(A'-E') SPECC1L et β-catenin ostendunt imbricatis maculas in marginibus cellulae cellae altae densitatis (sagittae).(F'-J') In cellulis SPECC1L-kd, β-catenin inficiens normalem densitatem cellae humilis apparet (F'-H'), sed expandit ut cellulae figurae mutationes (I', J', sagittas) indicantes AJ mutasse.Bars = 10 µm.
Nos igitur effectum defectus SPECC1L AJ determinare conati sumus.Pluribus AJ-consociatis notis usi sumus, inter partes canonicas F-actin, myosin IIb, β-catenin, et E-cadherin 24, 25, 26,27.Fibrae accentus actinae auctae sunt in cellulis SPECC1L-kd sicut antea descriptis (fig. 3A,B) 18 .Myosin IIb consociata cum filamentis actin simile incrementum in SPECC1L-kd cellulis vitro ostendit (fig. 3C,D).AJ-associatum β-catenin alligat cadherin in membrana cellae, ostendens normalem formam expressionis mellis in potestate cubocytis (fig. 3E,G).Interestingly, in imaginibus planis utentes microscopio confocale, β-catenin (fig. 3E,F) et E-cadherin (fig. 3G,H) maculavit membranam cellularum confluentium SPECC1L deficientium cellularum exemplaria prominentia extensa inficiens ostendit.Expansio haec ab AJ-associatis β-catenin tincta in kd cellulis ad confluentiam maxime pronunciata fuit, sed antecedere visae sunt mutationes in figura cellularum (Fig. 2F-J, F'-J').Ad determinandam naturam physicam huius extensae AJ maculantis, fines cellularum in superficie apicali-basali SPECC1L-kd U2OS cellulas per microscopii electronici transmissionis (Figura 3I,J) examinavimus.E contra cellulas (fig. 3I), quae regiones densas electronicas separatas habuerunt, indicativas AJ (sagittas), cellulas kd (fig. 3J) ostendit magnas, contiguas regiones densitatis electronici altae indicativi AJ secundum planum apicobasalem..Praeterea in sectionibus transversis observavimus membranam cellularum cellularum amplam in kd cellulis (fig. S1A,B), quae β-catenin et E-cadherin nexibus maculatis exemplar extensum explicat (fig. 3F,H).Pro munere SPECC1L in AJs, β-catenin cum SPECC1L in lysatibus confluentis cellularum U2OS co-immunitum erat (Fig. 3K).Cum extensis immuno- tibus pro AJ figentibus, TEM analysis constabat cum nostra hypothesi quod SPECC1L defectus AJ densitatem apicali-basialem et variationem auget.
Augetur F-actin maculans in cellulis kd ad 48 horas post-fusionem (T6; A, B).Mutata macula myosin IIb cum F-actin (C, D).Exemplar teres β-catenin et membranae E-cadherinae maculat cellularum potestate (E, G) aucta est in cellulis SPECC1L-kd (F, H).Bars = 10 µm.(I-J) Micrographae electronicae observantes coniunctas intercellulares apicales-basales.Cellulae continentes regiones electronico-densas distinctas ostendunt juncturas viscosas (I, sagittas).E contra, tota junctura apicali-basalis in SPECC1L-kd cellulae densae electronico apparuit (J, sagittae), densitatem augendam et dimissionem juncturae tenaces indicans.(K) β-catenin cum SPECC1L in confluente U2OS cellae lysatae coaeterna fuit.Imago ex uno loco sumpta repraesentans unum ex quatuor experimentis independentibus.
Ad partes SPECC1L in craniofacialis morphogenesis cognoscendam, exemplar musculum spec1l deficientis creavimus utentes duas lineas cellularum ES laquei independentes, DTM096 et RRH048 (BayGenomics, CA), quae repraesentant intron 1 et Specc1l transcripta in 15 (Fig. 1). .4A, figure S2).Locus genomica inserta vectoris inlecebrarum per totum genomum sequen- tium determinatum est et confirmatum per PCR (Fig. S2).Utraque laqueus consiliorum generum etiam in-fracturae fusionis Specc11-lacZ notariorum in captis permissa est.Propterea expressio lacZ inficiens X-gal determinata adhibita est in signum expressionis Specc11.Ambae allelae similes exempla lacZ expressio ostenderunt, cum captionem gene DTM096 in intron 1 ostendens fortiorem expressionem quam RRH048 in intron 15 (non ostensam).Attamen, Specc1l late exprimitur, praesertim valida expressio in plicas neuralis ad E8.5 (Figura 4B), in tubo neurali et processibus facialibus ad E9.5 et E10.5 (Figura 4C,D), et in evolutione membrorum. apud E10.5 et oculi (Figura 4D).Antea retulimus expressionem SPECC1L in primo arcu pharyngeo E10.5 adfuisse in epithelio et mesenchyme 18 subiecta, congruenter cum CNCC prosapia.Ad probationem SPECC1L expressionem in CNCC egimus E8.5 plicas neuralis (Figura 4E-J) et E9.5 sectiones cranii (Figura 4K-).Ad E8.5, SPECC1L caulae neuralis valde maculatae (fig. 4E, H), inter cellulas NCC venalicium maculatas (fig. 4G, J).Ad E9.5, SPECC1L (Fig. 4K, N) valde maculatum migrans CNCC co-maculatum cum AP2A (fig. 4L, M) vel SOX10 (fig. 4O, P).
(A) Schematica repraesentatio muris Specc11 gene monstrans vectorem iniectionem in ES DTM096 (intron 1) et RRH048 (intron 15) cellae clones.(BD) lacZ maculans embryonum heterozygoorum Specc1lDTM096 exprimentium Specc1l expressionis ab E8.5 ad E10.5.NE = neuroectoderm, NF = ovile neural, PA1 = arcus pharyngeus primus.(EP) SPECC1L immunis a NCC figulis AP2A et SOX10 in E8.5 (NF; EJ) plicae neuralis et E9.5 (KP) sectiones cranii.SPECC1L maculas late observatas in plicas neuralis E8.5 (E, H; sagittarum), inter cellulas intitulatas AP2A (F, G; sagittarum) et SOX10 (I, J; sagittarum).Ad E9.5, SPECC1L migrans CNCCs valde maculatus (K, N; sagittas) intitulatum AP2A (L, M; sagittas) et SOX10 (O, P; sagittas).
Transiens inter heterozygoum Specc1lDTM096/+ et Specc1lRRH048/+ mures ostendit duas laqueum generum allelarum non esse complementarium, et compositos heterozygotos et homozygotos embryonicos pro alterutro laqueo allele gene lethali (Tabula S1).Mendeliae rationes decrescentes indicant heterozygotes superstes in nativitate (expectata 1.34 vs. 2.0).Notata est humilitas perinatalis mortalitatis inter heterozygotas, quaedam anomalias craniofaciales habuit (fig. S3).Sed humilis penetratio harum phaenotyporum craniofacialium perinatalium difficilem reddit suis subiacentibus mechanismis pathophysiologicis investigandis.Ergo in embryone lethali phaenotypo mutantium homozygous Specc11 feruntur.
Pleraque composita heterozygoa vel homozygoa Specc1lDTM096/RRH048 mutant embryones post E9.5—10.5 (Figs. 5A-D), et tubus neuralis non anterius (Figs. 5B, D) claudit et interdum posterius occlusus (non ostensus) ..Hic defectus cranialis tubus clausurae neuralis cum pluribus CNCC notatis DLX2 manentibus in plicas neurali E10.5 associatus, nullam sectionem indicans (Figura 5A'-D').Ut si altiore magnitudo CNCC etiam reducta sit, CNCC lineas cum GFP in captione generum nostrarum lineis Wnt1-Cre et ROSAmTmG tagged.Amnis nos de totis embryonibus ordinatis GFP+NCC et GFP- (RFP+) non-NCC.Ad E9.5, proportio fluxus digestus GFP intitulatus CNCCs signanter inter WT et mutant embryones (non ostensus) significans specificationem normalem CNCC.Ideo hypothesizavimus residuas Wnt1-Cre et DLX2 maculas in plicas neuralis expositae (Figura 5B') ob defectum CNCC stratis, forte ob densitatem vel dispersionem cellularum AJ auctam, ut in cellulis SPECC1L-kd conspicitur.Inscriptiones NCC SOX10, AP2A et DLX2 adhibebamus ad confirmandam praesentiam CNCC in plica neurali (Figura 5E-R).Ad E8.5, neural ovile maculatum pro omnibus tribus NCC figentibus observatum est in sectionibus WT (Fig. 5E, G, I) et Specc1l mutant (Fig. 5F, H, J).Ad E9.5, dum NCC in sectionibus WT migrans NCC maculatis (Fig. 5M, O, Q), residua NCC maculas observata est in plicas neuralis Specc1l mutant embryones expositos (Fig. 5N, P, R).Quia SOX10 et DLX2 signum migrandi CNCCs, hic eventus suggerit SPECC1L deficientes CNCCs specificationem post migratoriam consequi sed e plicarum neurali migrare non possunt.
Defectus specc11 ducit ad clausuram tubam neuralis defectivam, delaminationem cristae cranialium cellarum neuralis et AJs.
(A, B') E9.5 WT (A) Embryo migrans cristas cranialium neuralis cellulas migrans (CNCC) intitulatum cum Wnt1-Cre (A').E contra, Specc11 mutant embryones apertos caulas neuralis (B), sagittarum) et CNCCs quae non migraverunt (B', sagittae).(C, D') Imagines campi lucidi (C, D') et immunes (C', D') CNCC titulus DLX2 de E10.5 WT embryones (C, C') et Specc1l (D, D').In embryonibus WT E10.5, DLX2-CNCC positivae arcus latrinas coloni (D', sagittas), cum in mutante, macula conspicua in plicas neuralis aperto (D', sagittas) persistit et in primo arcubus pharyngeis (D'; sagittas).) quibusdam maculatis (sagittis) significans calamitatem et migrationem CNCC.ER) Sectiones WT et Specc1l mutant embryones in mansionibus E8.5 (E-L) et E9.5 (M-R) intitulati sunt NCC inscriptiones SOX10 (E, F, M, N), AP2A (G, H; O, P) et DLX2 (I, J, Q, R).Ad E8.5, NCC maculas in ovile neurali generis silvestribus observatum (NF) et sectiones mutant.Co-tinguere inter SOX10 et β-catenin in E8.5 WT (K) et mutant (L) auctum aba-catenin in plicas neuralis limites cellularum maculantes.Ad E9.5, genus silvestre tinctum CNCCs migrantium (M, O, Q) observatum est, dum in mutante CNCCs in plicas neuralis aperta maculata (N, P, R).(S-Z) In vivo AJ analysin labella in sectionibus coronalibus WT et Specc11DTM096/RRH048 embryonum mutationis E9.5 .Planum sectionis approximatum in angulo dextro dextro demonstratur.In fibris mutant sectiones, auctis maculas F-actin (S, T) et myosin IIb (U, V) observatum est.Similes in vitro proventus in Fig. 3, in mutant embryones, aucta membrana inficiens pro β-catenin (W, X) et E-cadherin (Y, Z) observata.(AA-BB) Electron micrographum sectionis embryonis silvestris speciei ultra terminum cellae apical-basalis spectans distinctam regionem electronico-densam indicativam juncturae adhaesivae (AA, Sagittae).E contra in sectionibus specc11 mutant embryonum (BB, sagittarum), tota confluentia apicobasalis est electronica densa, significans densitatem auctam et dispersionem juncturae adhaesivae.
Ad hypothesin nostram quam stratam reductam AJ mutatam esse probamus, examinavimus AJ labellam in plicas neuralis specculi mutant embryonum expositorum (Fig. 5S-Z).Animadvertimus auctum fibrarum actinorum (fig. 5S, T) et concomitantis auctam localizationem myosin IIB maculantem fibrarum actinarum (fig. 5U, V).E-cadherin (fig. 5Y, Z) observavimus auctam maculam ab β-catenin (Fig. 5W, X) et E-cadherin (Fig. 5Y, Z) ad limites intercellulares.Examinavimus etiam β-catenin maculantem NCC in plicarum neurali embryonum E8.5 (Fig. 5K, L).β-catenin tinguere visus est fortior in Specc1l mutant plicas neuralis (fig. 5L et K), suggerens mutationes AJ inchoatas esse.In micrographis electronicis sectionum cranii embryonum E9.5, iterum observavimus auctum diffusum electronico-densum maculatum in Specc1l mutant embryones WT comparati (Fig. 5AA, BB et S1E-H).Hi sumpti eventus nostros in vitro proventuum in SPECC1L-kd U2OS cellulis adiuvant et suggerunt aberrantes AJ maculas antecedere CNCC stratificationes in mutant embryonibus nostris.
Datae notae contra relationem contrariam inter actionem AKT et stabilitatem E-cadherin, 17,28 hypothesessimus implicationem significantis PI3K-AKT.Praeterea animadvertimus subepidermalem lesionem in nonnullis nostris embryonibus mutantibus, qui lethality evaserunt (<5%) apud E9.5—10.5 et loco circa E13.5 consederunt (Fig. S3).Vesiculae subepidermales notae sunt reductae PI3K-AKT significantes innixas PDGFRα12.Fantauzzo et al.(2014) distractionem activationis PDGFRα fundatae PI3K in PdgfraPI3K/PI3K mutant embryones eventus in vesiculas subepidermalia, defectus tubi neuralis, et palatum phaenotyporum fissum.Gradus enim pan-AKT et phosphorylatae Ser473-AKT vivo in specc1l mutant fibras ad E9.5 comprehensionem embryonalem redacti sunt (Fig. 6A-D).Deminutio graduum phosphorylatorum Ser473-AKT omnino ob diminutionem gradus PAN-AKT in vivo (FIG. 6E) et in vitro (FIG. 6F).An in diminutione vitro observatum est solum cum U2OS cellulae valde confluentes cum mutationibus in figura cellae et densitatis AJ (Figura 6D).Ita, notitia nostra suggeret SPECC1L novum positivum moderatorem esse PI3K-AKT significans in morphogenesis craniofacialis.
(A-E) E8.5 et E9.5 (C, D) sectiones cranii vel E9.5 lysates e Specc1l mutant embryones (E) gradus phosphorylatos activos S473-AKT et pan-AKT reductionem comparatus ad imperium Saeerdotis.Occidens deletio fiebat in lysates et mutant lysates agrestes sub iisdem conditionibus.Imagines exhibentur SPECC1L ab una labe desumptae.Eadem macula sublata est et examinata cum anti-pan-act et β actin elementorum.Gradus Pan-AKT in E8.5 plicarum neuralium (A, B) et gradus phosphorylatorum S473-AKT in E9.5 sectiones cranii insigniter reductae sunt.(F) Gradus Pan-AKT similiter reducti sunt in lysates de SPECC1L-kd U2OS cellulis ad confluentem altum collectis.Erroris vectes repraesentant SEMS ex tribus quantitatibus Occidentis independentibus dele.(GJ) Sectiones WT embryonum in E9.5 maculatae KI67 et adhaeserunt caspase 3, respective, ostendens cellulam multiplicationem (G, G') et actuositatem apoptoticam parvam (H, H').Specc11 mutant embryones cellulae multiplicationis comparabiles (I), sed numerus cellularum apoptosin sustinentium signanter augetur (J).
Nos igitur notas multiplicationis et apoptosis examinamus.Quamlibet differentiam in proliferatione embryonum E9.5 (Fig. 6E, G comparati I) non observavimus cum indice multiplicationis 82.5% pro WT mutantes et 86.5% in Specc1l mutantes KI67 tinguentes (p <0.56, Piscatoris. accurata test).Similiter differentiam apoptosim mensuratam non observavimus tinguere pro adglutinato caspase 3 in plicarum neurali E8.5 usque ad embryonem comprehensionem (non ostensam) (non ostensum).E contra, apoptosis significanter aucta est in omnibus E9.5 mutant embryones (fig. 6F, H, J).Haec altiore augmento in apoptosi consentaneum est cum reductis PI3K-AKT significationis et lethality embryonicae primae 29, 30,31.
Deinde, ut munus causale pro PI3K-AKT significans in AJ mutationes in cellulis nostris kd confirmet, chemica in potestate et kd cellulis viam mutavimus (Figura 7A-F).Figurae cellae ut titulus usus est mutationis phaenotypi in cellulis confluentibus SPECC1L-kd observatis, quas quantitatis utentes ratione dimensionis longissimae (longitudinem) ad dimensionem verticalem respondentem (latitudinem).Ratio 1 expectatur pro relative rotundis vel cuboidalibus (Figura 7G).Praeter cellam figuram, effectum etiam in AJ per β-catenin maculantem confirmavimus (Fig. 7A'-F').Inhibitio viae PI3K-AKT utens wortmannin satis erat ad cellulam mutandam figuram in cellulis moderandis (Figura 7A,C) et AJ (Figura 7A').PI3K-AKT activator SC-79 figuram cellularum (FIG. 7A, E) vel AJ expansionem (FIG. 7A') in cellulis moderandis non afficit.In cellulis SPECC1L-kd, ulterioris itineris suppressio PI3K-AKT in apoptosi aucta consecuta est (Fig. 7B,D) et aucta notata in β-catenin maculante (fig. 7B'), consentaneum cum nostris in gravibus mutationibus vivo.AKT phaenotyporum (Figura 7B, F) et AJ phaenotyporum (figurae 7B) signanter auctae viae cellae significanter auctae sunt (Figura 7B").Mutationes in figura cellae quantae sunt ut rotunditatis cellulae (CCR) et ad significationem comparatae ut supra (FIG. 7G).Re quidem vera in cellulis (Fig. 7G, CCR = 1.56), wortmannin curatio satis erat ad figuram cellam signanter mutandam (Fig. 7G, CCR = 3.61, p <2.4 10-9) quatenus similes observati. in SPECC1L.-kd cellulae (Fig. 7G, CCR = 3.46).Wortmannin tractatio cellularum SPECC1L-kd (fig. 7G, CCR = 3.60, neglegenda) non magis notabilis fuit quam increata cellulas kd (fig. 7G, CCR = 3.46, insensibiles) vel wortmannin tractatas cellulas potestate (fig. 7G)., CCR = 3.46, neglegenda) praeterea afficit elongationem cellam (7G, CCR = 3.61, neglegendam).Maxime SC-79 AKT activator phaenotypum elongatum SPECC1L-kd cellularum restituit (Fig. 7G, CCR = 1.74, p < 6.2 10-12).Hi eventus confirmant SPECC1L PI3K-AKT moderari significans et suggerit mediocrem diminutionem in SPECC1L adhaesionem cellam afficit, dum vehemens decrementum ad apoptosin ducit (Fig. 8).
(A-F') Imperium (A, C, E) et SPECC1L-kd (B, D, F) cellulae tractatae cum PI3K-AKT tramite inhibitoris wortmannin (C, D) seu SC-79 activator (E, F) Curatio . Cellae increatae sunt cuboidales (A) cum normalibus β-cat cellulosis maculatis (A'), dum cellulae kd elongatae sunt (B) auctis β-cat tinctis (B').Post semitam suppressionem PI3K-AKT, cellulas elongatas (C) cum β-cat expansione (C') suppressas, dum cellulae kd apoptosin subire coeperunt (D), similes embryonibus nostris valde mutatis et ostendens β-cat valde auctus.tinguere (D').Post viae activationem PI3K-AKT, cellulae potestate cuboidales (E) manserunt et normales β-cat (E') maculaverunt, dum cellulae kd figuram cellularum (F) et β-cat (F') significanter auctam ostenderunt (G) Gradus figurae cellae mutationis in (AF) erat quanta utens ratione cellae rotunditatis (CCR) dimensionis longissimae (longitudo) et correspondente dimensioni verticali (latitudo) utens programmate MetaMorphi.Increatae (NT) SPECC1L-kd cellulae (CCR = 3.46) erant insigniter longiores quam cellulae potestate (CCR = 1.56, p < 6.1 10-13).Inhibitio Wort PI3K-AKT viarum in cellulis moderandis satis erat causare similem elongationem in figura cellularum (CCR=3.61, p<2.4×10-9).Similiter, AKT activum per SC-79 in SPECC1L-kd cellulas cellae elongationis restauratae ad gradus moderandos (CCR = 1.74, p < 6.2 10-12).Wortmannin tractatum de SPECC1L-kd cellularum in apoptosibus auctis consecuta est, sed nulla ulterior incrementa in figurae cellae mutationis (CCR=3.60) comparata kd increato (CCR=3.46, ns) vel wortmannin tractatorum cellularum potestate (3.61) observata est.ns = non refert.+/- SEM mensurae pro 50 cellulis ostenduntur.Discrimina statistica computata sunt utendo discipulo's t-test.
(A) Schematica repraesentatio inhibitionis et activationis PI3K-AKT viarum quae in AJ mutationibus fiunt et subsidio, respective.(B) Propositum exemplar dapibus stabilizationis AKT per SPECC1L.
Praemigratorium CNCCs requirunt AJ lysim separare ab plica neuroepitheliali neutroepitheli anteriori a cellulis 1,15,32.Auctus tincturae partium AJ et amissio distributionis asymmetricae apicali-basalis in SPECC1L-deficientibus cellulis tam in vitro quam in vivo, cum propinquitate corporis SPECC1L ad β-catenin coniuncta, suggerunt ut functiones SPECC1L ad stabilitatem loci AJ recte conservandam pro organizatio musculorum.actin cytoskeleton.Consociatio SPECC1L cum cytoskeleton et β-catenin et aucta numero filamentorum condensatorum in absentia SPECC1L, congruit cum aucto densitatis AJ observatae.Alia possibilitas est quod numerus fibrarum actinorum in SPECC1L deficientibus cellulis auctus mutationem tensionis intercellularis ducit.Quoniam vis cellularum affectus AJ 33 motus, voltages mutationes in diffusius AJ 34 evenire possunt.Quaelibet igitur mutationum stratis CNCC accidet.
Wnt1 exprimitur in plicas neuralis veterum quae cristas cellas neural oriuntur.Sic, Wnt1-cre- typum stemmatis tam pro- notis ac migrantibus NCC35.Nihilominus, Wnt1 etiam notat dorsales telae cerebri clones etiam e plicarum neuralis veterum 35,36 derivatos, probabile faciens quod maculam nostram E9.5 mutants pro Wnt1 in plicas apertas neuralis notas non est CNCC.Nostra macula affirmativa pro NCC figentibus AP2A et SOX10 confirmavit plicas neuralis Specc11 mutant embryonum expositos CNCC continere.Praeterea, cum AP2A et SOX10 notae primae migrantis NCC sint, positivus inficiens notavit has cellulas esse post migratorias CNCC quae ab E9.5 strari non possunt.
Nostra notitia suggerit ordinationem hypotheticam ipsius AJ per SPECC1L mediatam per PI3K-AKT significationis.AKT significatio reducitur in SPECC1L cellulis deficientibus et texturis.Inventiones by Fantauzzo et al.munus directum sustine pro PI3K-AKT significans in morphogenesis craniofacialis.(2014) defectum activationis PDGFRα-substructio PI3K-AKT significans ostendit in phaenotypi palato fissura.Ostendimus etiam inhibitionem viae PI3K-AKT sufficere ad mutationem AJ et figuram cellularum in cellulis U2OS.Inventionibus nostris constant, Cain et al.37 demonstravit downregulationem PI3K α110 subunitis in cellulis endothelialibus eventis simili incremento in pericellulare aba-catenin tinguentis, ad augmentum in "indice connectivo".Tamen in cellulis endothelialibus, quarum actin filamentis iam valde ordinatae sunt, suppressio PI3K-AKT viae resultat in figura cellae solutae.E contra SPECC1L-kd U2OS cellulae figuram cellulae elongatam demonstraverunt.Haec differentia potest esse genus cellulae specificae.Dum suppressio PI3K-AKT significans perpetuum afficit cytoskeleton, effectus in figura cellularum determinatur ex mutationibus in tensione per mutationes in densitate et ordinatione fibrarum actinarum centralium.In cellulis U2OS tantum figura cellae mutatur ut titulus SPECC1L deficientis AJ mutationis et salutis.Demum, hypothesizamus inhibitionem itineris AKT in SPECC1L defectus stabilitatem AJ augere et in CNCC delaminationem minuere.
Interestingly, gradus pan-AKT in vitro redacti et in vivo praeter phosphorylatae 473-AKT gradus absentia SPECC1L, ordinationem suggerentes PI3K-AKT significantes in plano dapibus stabilitatis vel turnoveri AKT.Species SPECC1L et MID1 genes, ambo cum Opitz/GBBB syndrome coniunguntur, encode proteins quae microtubulas stabiliunt 18,22.Mechanismus qua microtubula stabilizatio SPECC1L et MID1 mediata non plene intelligitur.In SPECC1L, haec stabilizatio acetylationem auget subset microtubularum 18 .Fieri potest ut SPECC1L simili mechanismo utitur ad alios servos stabiliendos ut AKT.Ostensum est acetylationem lysinae residua in AKT interdum decrescere in localizationis et phosphorylation38 membranarum ducere.Praeterea ubiquitinatio catenae K63 in eadem residuo lysine in AKT requiritur ad eius membranam localizationem et activationem 39,40.Inter plures factores inter se mutuo cum SPECC1L servo qui in variis altitudinibus per fermentum duo-hybridarum screens, quattuor - CCDC841, ECM2942, APC et UBE2I43 implicatae sunt, interdum turnoveri seu stabilitatis per ubiquitinationem vel sumoylationem implicatae sunt.SPECC1L involvi potest in modificatione post-translational residua Lysine AKT, stabilitate AKT afficiens.Nihilominus, partes SPECC1L criticae in localizatione et stabilitate dapibus AKT elucidandae restant.
Gravis defectus in SPECC1L expressio in vivo consecuta est aucta AJ titulus maculas et defectivas CNCC obductos, necnon apoptosis et lethalitas embryonica prima aucta.Priores relationes docuerunt murem mutantes gradus apoptosis auctos coniungi cum defectibus neuralis tubo 44, 45, 46, 47, et defectibus craniofacialibus.Propositum est nimiam mortem cellularum in plicaribus neuralis vel arcubus pharyngeis inveniri in insufficienti numero cellularum ad motum morphogeneticum proprium requisiti 48,49,50.E contra, noster SPECC1L defectus cellulae lineis modice reductis SPECC1L expressio ostendit solas AJ mutationes sine evidentia auctae mortis cellae.Inhibitio tamen chemica itineris PI3K-AKT in his cellulis Kd evenit in apoptosi aucta.Ita moderata diminutio in SPECC1L expressione vel functione cellam superstes efficit.Hoc consentaneum est cum observatione rara Specc11 mutant embryones qui capiuntur in st.E9.5-fortasse ob efficientiam redactae geneticae capturae - neuralis fistulas claudere possunt ac postea in evolutione desinunt, saepe cum defectibus craniofacialibus (Fig. S3).Huic etiam consentaneum est rarum eventum embryonum heterozygoorum Specc1l cum abnormitatibus craniofacialibus — probabiliter ob efficientiam gene ceperunt augendam — necnon inventio in zebrafish in qua unus e duobus SPECC1L orthologiis (specc1lb) phaenotypis embryonicis late, cum detrimento. maxillae inferiores et bilateralis fissuras51.Ita, heterozygous SPECC1L mutationum amissio-functionis in aegris humanis identificatis, parvas imminutiones efficere potest in functione SPECC1L in morphogenesis craniofacialis, sufficiens ad explicandas suas fissuras orofaciales.SPECC1L-fundatur ordinatio notorum intercellularium etiam in palatogenesi et fusione arcuum pharyngei munere fungere potest.Praeterea studia functionis SPECC1L illustrare adiuvabunt partes contactus intercellulares temporales in CNCC in tubo neurali clausurae in motu neuroepitheliali cellae et morphogenesis craniofacialis.
U2OS osteosarcoma ditionis et SPECC1L-kd cellulae antea descriptae sunt (Saadi et al., 2011).Elementa contra SPECC1L etiam antea denotata sunt (Saadi et al., 2011).Anti-β-cateninum elementorum (lepus 1: 1000; Santa Cruz, Dallas, TX) (mus; 1: 1000; Cellae significationis Technologiae, Danvers, MA), myosin IIb (1:1000; Sigma-Aldrich, St. E-cadherin (1:1000; Abkam, Cambridge, MA), AP2A (1:1000; Novus Biologics, Littleton, Colo.), SOX10 (1:1000; 1000; , California), DLX2 (1:1000; Abcam, Cambridge, MA), phospho-Ser473-AKT (1:1000; Cell significans Technology, Danvers, MA), pan-AKT (1:1000; ThermoFisher Scientific, Waltham, MA ) , KI67 (1:1000; Cell significativa Technologia, Danvers, MA), adhaesit caspase 3 (1:1000; Cell significativa Technologia, Danvers, MA) et β-actin (1:2500; Sigma-Aldrich, St. Louis. MO) usus est ut dictum est..Filamenta Actin cum rhodamine phalloidin maculata Acti-macula (Cytoskeleton, Denver, Colorado).
U2OS cellulas potestates et cellas SPECC1L-kd in vexillum altae glucose DMEM excultae sunt, cum 10% foetus serum bubulum (Vita Technologies, Carlsbad, CA).Pro mutationibus AJ, 2 x 105 cellulae seminatae in vitro tractata cum 0.1% gelatina porcina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) observata sunt pro mutationibus in figura cellularum.Cellulae diversis punctis temporis indicatis collectae sunt: ​​4 horae post seminis (t = 1), horarum 24 post seminis (t = 2), confluentes sine mutatione in figura cellularum (t = 3), mutatio in figura cellularum (t = 4). , 24 h post cellae figuram muta (t = 5) et 48 h post cellae figuram (t = 6) (fig. 1. 2, 3).Ad tramitem PI3K-AKT modulandum, cellulae excultae ad significatas concentrationes cum PI3K-AKT inhibitoris wortmannin (TOCRIS Biosciences, Minneapolis, Minnesota) seu SC-79 activator (TOCRIS Biosciences, Minneapolis Adams, Minnesota).Medium continens oeconomiae cotidie mutabatur.
Artus tabulae in viva potestate factae sunt et KD cellae sub condicionibus culturae normalibus factae, et antithesis discrepantiae imagines singulis diebus per 10 minutas colligebantur.Imagines acquisitae sunt utens microscopio moderato Leica DM IRB inverso, cum scaena mechanica instructa et 10 × N-PLAN obiectiva cum QImaging Retiga-SRV camera coniuncta.Per imaginationem culturae cellularum 37°C in atmosphaera humida cum 5% CO2 conservata sunt.
Insidiae generum duae ES cellae lineae DTM096 et RRH048 e Regionali Mutante Muris Resource Centre (UC Davis, CA) generabant lineas specc11 mus deficientes, designatae Specc1lgtDTM096 et Specc1lgtRRH046.Breviter, 129/REJ ES cellulae inspirationocystae C57BL6 injectae sunt.Ex chimaerico masculino mures C57BL6 mures foeminae educati sunt ad cognoscendum foetum cum agouti tunica coloratum.Praesens captionem generum vectoris insertam adhibitum ad heterozygotes recognoscendas.Mures in campo mixto servabantur 129/REJ;C57BL6.Locus insertionis situs laquei geneticae vectoris confirmatus est ab RT-PCR, genoma sequen- tio, et complementum geneticae (Figura suppletiva 1).Ad CNCC prolem duplicem heterozygoi Specc1lGT murium, ROSAmTmG (#007576) et Wnt1-Cre (#003829) mures (Jackson Laboratorium, Bar Harbor, ME) traiecerunt ad producendum ROSAmTmG et Wnt1-Cre allelam in Specc1l mutant embryones.Omnia experimenta in muribus facta sunt secundum protocolla ab Cura Animali Institutionis approbata et Usus Committee Universitatis Kansas Medical Centre.
Embryones fixae sunt in (1% formaldehyde, 0,2% glutaraldehyde, 2 mM MgCl2, 0.02% NP-40, 5 mM EGTA) pro 60 min in locus temperatus.Post fixationem in X-gal inficiens solutionem (potassium ferricyanidi 5 mM, potassium ferrocyanidi 5 mM, 2 mM MgCl2, 0.01% sodium deoxycholatum, 0.02% NP-40, 1 mg/ml X-gal) Perlatum est macula 37°C .°C intra 1-6 horas.Embryones post-fixae sunt in 4% PFA et subjiciuntur.
Ad occidentalem deletionem, cellulae quiddam passivum lysis (Promega, Fitchburg, WI) suppletum mixtisque inhibitoribus consistere protease (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO).Lysates in 12% polyacrylamidei Mini-proteani TGX processit nes (Bio-Rad, Hercules, CA) et ad membranas Immobilon PVDF transtulerunt (EMD Millipore, Billerica, MA).Membranae in 5% lacte clausae sunt in PBS, in quibus 0,1% Tween continentur.elementorum pernoctare in 4°C vel una hora in cella temperie incubata sunt.Femto SuperSignal West ECL reagens (Thermo Scientific, Waltham, MA) pro signo generationis adhibitus est.Ad immunitatem, embryones pernoctare in 4% PFA/PBS fixi et cryopservari.TEXTUS cryosectiones clausae sunt in PBS continens 1% normales serum caprarum (Thermo Scientific, Waltham, MA) et 0.1% Triton X-100 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) et tunc incubatis 4°C in incubatore durante nocte.cum anti-anticorpore et fluorescenti anticorpore secundario (1:1000) pro 1 hora 4°C.Partes maculatae positae sunt in medio ProLong auri (Thermo Scientific, Waltham MA) et imagines planae adhibitae sunt microscopio confocale Leica TCS SPE.Quaelibet immunitas fiebat ut tria experimenta independentia in cirossectionibus minimorum embryonum mutantium.Experimentum repraesentativum ostenditur.
Cellulae in quiddam RIPA mutationis incubatae (20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1% NP-40, 130 mM NaCl, 10% glycerolum, 2 mM EDTA, claudunt protease inhibitoris (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) Breviter, lysates cum globulis magneticis G (Vitae Technologies, Carlsbad, CA) praefigurati sunt, et tunc pernoctare in 4° C. cum anti-SPECC1L vel IgG globuli dapibus G interdum ad SPECC1L extrahendam adhibita et deletio occidentis fiebat utens anti. -β-catenin anticorpus supra descriptum. Experimenta co-IP ostensa sunt quatuor experimentorum independentium repraesentativa.
Fixae cellulae excultae aut mus telae embryonis praebebantur centro microscopii electronico in Universitate Kansas Medical Centre.Breviter, exempla in EMbed 812 resinae (Electron Microscopiae Scientiarum, Fort Washington, PA), polymerized pernoctare ad 60°C, et ad 80 nm sectione adhibita Leica UC7 ultramicrotome ferro adamante instructa.Sectiones subjiciuntur utentes JEOL JEM-1400 microscopio electronico transmisso cum 100 kV Lab6 sclopeto instructi.
Quomodo hoc articulum citemus: Wilson, NR et al.Defectus SPECC1L auget stabilitatem artuum plicatorum et minuitur delaminatio cristae cranii cellae neuralis.de scientia.6, 17735;doi: 10.1038/srep17735 (2016).
Saint-Jeanne, J.-P.Inductio et differentia cristae neuralis.(Springer Science + Negotia Media; Landes Bioscience/Eurekah.com, 2006).
Cordero, DR et al.Cremae cristae craniales in motu neurali: earum partes in evolutione craniofaciali.Acta Societatis Medical Genetics American.Pars A 155A, 270-279, doi: 10.1002/ajmg.a.33702 (2011).
Boland, RP Neurocristopathia: eius incrementum et progressum per XX annos.Pediatrician.de morbis.officinam.medicamentum.17, 1–25 (1997).
Mangold E., Ludwig KU et Noten MM Breakthrough in geneticis foraminum orofacialium.Trends in Medicina Moleculari 17, 725–733, doi:10.1016/j.molmed.2011.07.007 (2011).
Minu, M. et Leo, FM, machinationes molaeculares cranii cristae cellae neuralis migrationis et exemplaria in evolutione craniofaciali.Progressus 137, 2605–2621, doi: 10.1242/dev.040048 (2010).
Dixon, MJ, Marazita, ML, Beaty, TH et Murray, JK Fissile labium et palatum: intellectus geneticae et influentiae environmental.naturalis comment.Genetics 12, 167-178, doi: 10.1038/nrg2933 (2011).
Ingram, CR et al.morphogenesis abnormes cutis, membrorum et regionis craniofacialis in factore 6 interferon-regulante (Irf6)-deficiente murium.National Genette.38, 1335-1340, doi: 10.1038/ng1903 (2006).
Peyrard-Janvid, M. et al.Mutationes dominantes in GRHL3 causa syndrome van der Waord et progressionem peridermi oralis imminuunt.Am J Hum Genet 94, 23–32, doi: 10.1016/j.ajhg.2013.11.009 (2014).
Harris, MJ et Juriloff, DM Renova indicem mus mutantium cum defectibus in tubo neurali clausurae et progressu ad intelligentiam geneticam clausuram neuralis tubi.De inquisitione vitiorum nativitatis.Pars A, Fusce et Teratologiae M. LXXXVIII, 653-669, doi: 10.1002/bdra.20676 (2010).
Fantauzzo, KA & Soriano, P. PI3K mediata PDGFRalpha significativa regit salutem et multiplicationem in evolutione sceletali per viam intracellularem dependens p53.Gene Development 28, 1005–1017, doi: 10.1101/gad.238709.114 (2014).
Kopp, AJ, Viridis, ND et Murdoch, JN passis: Relatio convergentis expansionis ad tubo neurali clausurae.Trends in neurology.26, 453-455, doi: 10.1016/S0166-2236(03)00212-1 (2003).